제인과 프라이머 디자인 방법을 가르쳐 주시겠습니까

< P > < P > ① 프라이머는 핵산 시리즈 보수 지역 내에서 설계되고 특이성이 있어야 한다.

프라이머와 비특이적 증폭 시퀀스의 동원성은 70 개를 넘지 않거나 8 개 연속 상보성 염기의 동원을 초과하지 않아야 한다.

② 제품은 2 차 구조를 형성 할 수 없다.

일부 프라이머가 유효하지 않은 주된 이유는 프라이머 반복 영역 DNA 2 차 구조의 영향입니다. 확장 세그먼트를 선택할 때는 2 차 구조 영역을 피하는 것이 좋습니다.

③ 프라이머 길이는 일반적으로 15~30 염기 사이입니다.

④ G+C 함량은 40~60 사이입니다.

⑤ 염기는 무작위로 분포해야 한다.

프라이머 중 네 가지 염기의 분포는 무작위적인 것이 가장 좋으며, 폴리퓨린이나 폴리피리미딘의 존재는 없어야 한다. 특히 3' 끝은 3 개의 연속 G 또는 C 를 초과해서는 안 되므로 G+C 농축 시퀀스 영역에서 프라이머가 잘못 발생할 수 있습니다.

⑥ 프라이머 자체

프라이머 자체는 상보성 서열이 없어야 한다. 그렇지 않으면 프라이머 자체가 헤어핀 구조 치아 프라이머 자체로 접히게 된다. 이 2 차 구조는 공간 비트 저항으로 인해 프라이머와 템플릿의 리 폴딩에 영향을 줄 수 있습니다. 인공으로 판단하면 프라이머 자체의 연속 상보성 염기는 3bp 보다 클 수 없다.

⑦ 프라이머 사이

두 프라이머 사이에는 상호 보완적이지 않아야 하며, 특히 프라이머 이량 체의 형성을 방지하기 위해 3' 끝의 상호 보완적인 중첩을 피해야 한다. 한 쌍의 유인물 사이에는 4 개의 연속 염기의 동원성이나 상보성을 초과해서는 안 된다.

⑧ 프라이머 5' 끝은 손질할 수 있다.

프라이머의 5' 끝은 PCR 제품의 길이를 제한하며 증폭 특이성에 거의 영향을 주지 않습니다. 따라서 증폭의 특이성에 영향을 주지 않고 손질할 수 있다. 프라이머 5' 엔드 변형은 다음과 같습니다: 효소 절단 부위; 바이오틴, 형광, 디곡신, Eu3+ 등을 표시하십시오. 단백질 결합 DNA 서열을 도입하다. 돌연변이 위치 도입, 돌연변이 시퀀스 삽입 및 누락, 하위 시퀀스 도입 등이 있습니다.

⑨프라이머 3' 끝은 손질할 수 없습니다.

프라이머의 확장은 3' 끝에서 시작되며 어떤 수식도 할 수 없습니다. 3' 끝도 어떤 2 차 구조도 형성될 수 없다. 특별한 PCR(AS-PCR) 반응에서 프라이머 3' 끝이 잘못 배합될 수 없다.

< P > ⑩프라이머 3' 끝은 코돈 3 위를 피해야 한다.

확장 인코딩 영역과 같은 프라이머 3' 끝은 코돈 3 위에서 멈추지 마십시오. 코돈 3 위가 쉽게 단순화되어 증폭 특이성과 효율성에 영향을 미칠 수 있습니다.