흰 반점 스크리닝을위한 흰 반점 스크리닝 원리

는 재구성자 필터링의 한 가지 방법으로, 일부 벡터에는 재구성자를 만드는 데 사용할 수 있는 다중 복제 지점이 포함된 베타-반유당효소 N 끝 알파 세그먼트의 인코딩 영역이 있습니다. 이 전달체는 플루토늄-반유당효소 C 단단 조각만 코딩하는 돌연변이 숙주 세포에 적용된다. 따라서, 숙주 및 플라스미드 코딩 단편은 갈락토오스 배당체 활성은 없지만 동시에 존재합니다.

< P > < P > 알파 조각과 오메가 조각은 α-상보성을 통해 효소 활성을 가진 β-반유당효소를 형성할 수 있다. 이런 식으로 lacZ 유전자는 근조작 유전자 세그먼트가 부족한 숙주 세포와 완전한 근조작 유전자 세그먼트가 있는 플라스미드 사이에 보완을 실현했다. 외인성 DNA 가 플라스미드의 다중 복제 부위에 삽입되면 알파 단편의 코딩이 거의 불가피하게 파괴되어 재조합 플라스미드가 있는 LacZ- 박테리아가 흰색 식민지를 형성하게 된다.

확장 데이터:

파란 흰 반점 필터링 원리

일부 벡터 (예: PUC 시리즈 플라스미드) 에는 베타-반유락토스테아제 (lacZ)N 끝 알파 세그먼트의 인코딩 영역이 있습니다

이 벡터는 플루토늄-반유당효소 C 단만 코딩하는 돌연변이 숙주 세포에 적용된다. 따라서, 숙주 및 플라스미드 코딩 단편은 갈락토오스 배당체 활성이 없지만 동시에 존재할 때 α 단편과 ω 단편은 α-상보성을 통해 효소 활성을 갖는 β-갈락토오스 배당체를 형성 할 수있다. 이런 식으로 lacZ 유전자는 근조작 유전자 세그먼트가 부족한 숙주 세포와 완전한 근조작 유전자 세그먼트가 있는 플라스미드 사이에 보완을 실현했다.

α-상호 보완으로 생성된 LacZ+ 박테리아는 유도제 IPTG (이프로필 유황대 반유당제) 의 작용으로 생색 기질 X-Gal 이 존재할 때 파란 균군을 생산한다. 외인성 DNA 가 플라스미드의 다중 복제 부위에 삽입되면 알파 단편의 코딩이 거의 불가피하게 파괴되어 재조합 플라스미드가 있는 LacZ- 박테리아가 흰색 식민지를 형성하게 된다. 이 재조합 체의 스크리닝은 청색 흰 반점 스크리닝이라고합니다.