변성 폴리 아크릴 아미드 겔 전기 영동의 실험적 단계

1) 아크릴 아미드 단량체 저장액: 14.55g 아크릴 아미드와 0.45g N, N 나중에 사용하기 위해 4 C 의 갈색 병에 보관하다.

2) 농축 겔 완충액 (0.5mol/L Tris-HCl, pH6.8): 3.03 gtris 를 40mL 쌍증기수에 녹이고 4mol/L 염산으로 pH 를 6.8 로 조절한다. 그런 다음 이중 증발수로 50 밀리리터까지 희석한다. 나중에 사용하기 위해 4 c 아래에 보관하십시오.

3) 분리 겔 버퍼 (1.5mol/L Tris-HCl, pH 8.9):18.16 gtris 용해 이중 증기로 100mL 로 희석한 후 나중에 사용하기 위해 4 C 에 저장합니다.

4) 10%(AP) 과황산 암모늄: 0. 1g 과황산 암모늄은 1.0mL 쌍증기수에 용해되어 사용하기 전에 신선하게 준비한다.

5) 전극 완충액 (0.025mol/L Tris, 0.2mol/L 글리신, ph 8.3):15.14g tris+72.07g 글리신 실온에서 한 달 동안 보관할 수 있습니다.

6) 샘플 버퍼 (0. 1mol/L Tris-HCl, pH 6.8): 2ml 농축 겔 버퍼, 1mL87% 글리세롤 및 0./

2.Native-PAGE 배합표 분리 젤: 6.6ml 30% 아크릴 아미드 쌍증기 수용액, 8.0 밀리리터 1.5 무어/리터 트리 (PH 8.8) 및 5.0 밀리리터/Kloc-0 200μl TEMED 15μl 농축 겔: 이중 증발수 6.8ml 30% 아크릴 아미드 용액1.7 ml 0.5 mol/l tris (ph 6.8)/kloc-

쌍증기로 유리판, 고무 패드, 빗을 씻고, 알코올 솜으로 닦고, 전기 수영 탱크를 설치하고, 표 1 에 따라 분리접착제 (12%) 와 농축액 (5%) 을 준비합니다. 마지막으로 황산암모늄과 TEMED 를 첨가한 후 중합을 시작한다. 즉시 혼합하여 두 유리판 사이에 부어야 합니다. 분리 접착제는 두 개의 유리판 사이에 적절한 높이를 남겨 샘플 구멍의 전면을 약 2.5cm 정도 분리해야 합니다. 높이가 약 0.5cm 인 쌍증기를 천천히 접착제 상단에 넣는다. 분리접착제가 완전히 수렴된 후 윗층의 쌍증기를 버리고, 쌍증기로 젤의 윗부분을 씻고, 흡수지로 남은 물방울을 빨아들인다. 두꺼운 접착제를 유리판 중간층에 붓고 빗을 삽입하고, 두꺼운 접착제가 완전히 수렴될 때까지 빗을 뽑고, 즉시 쌍증기수로 샘플 구멍을 청소한다. 전극 버퍼액을 넣고 미량샘플러로 샘플구멍 밑면 지점에서 200 볼트 전압에서 전기 영동을 합니다. 브롬페놀 블루가 분리 젤에 도달하면 전압이 250 볼트로 바뀌고, 브롬페놀 블루가 젤의 바닥에 도달할 때까지 전기 영동을 계속한다. 젤을 벗기고 100ml 기질 용액에 담가 염색 1 시간, 테이프가 발색된 후 바로 사진을 찍습니다. 그리고 젤은 코마스 밝은 파란색으로 염색합니다.